标 本 的 采 集 与 处 理
标 本 的 采 集 与 处 理
临床化学检验中多为血液标本，次为尿液，少数是其他体液(如脑脊液、羊水、唾液、胸腹水)。这些标本的化学成分含量可因为某些因素的影响，也可因标本采集和处理不当而发生变化，从而影响标本测定结果的准确性。因此，在采集标本时要考虑并设法消除这些因素的影响。
标本采集注意事项
一、抗凝剂(即能抵抗血液凝固的化学物质)的选择与使用
1. 枸橼酸钠：能与血液中的钙离子形成络合物阻止血液凝固。浓度为32.06g/L。与血液的比例为1:9，主要用于血凝试验；与血液的比例为1:4(0.4ml加血液1.6ml)用于魏氏法血沉测定。
2. 乙二胺四乙酸盐(EDTAK2)：与血液中的钙离子结合形成络合物阻止血液凝固。浓度为15g/L，1mg乙二胺四乙酸盐可抗凝1ml血液，对血细胞特别是血小板影响小，较易溶解，目前检测多为EDTAK2作为血液细胞常规检测。
3. 肝素：通过加强抗凝血酶Ⅲ因子灭活丝氨酸蛋白酶，阻止凝血酶的形成而防止血液凝固。浓度为1g/L水溶液，主要用于免疫检测，也可用于红细胞、血红蛋白、血细胞比积和多种生化分析检测。
4. 特殊抗凝管：高血压管、内皮素、心钠素、前列腺素管等检测时需预约。
二、餐后抽血：血糖、血脂等可增高而影响测定结果，故一般应空腹抽血。
三、食物成分：高蛋白、高脂肪、高嘌呤饮食可引起血中蛋白、血脂、尿酸增高，香蕉、咖啡等可影响尿中儿茶酚胺代谢产物的测定等。
四、药物：异菸肼、庆大霉素、氨苄青霉素可使谷丙转氨酶活性增高，咖啡因可使胆红素增加。药物对部分检验结果有不同程度的干扰，所以应尽量在用药前采血。或者建议检查前几天停止使用有干扰的药物，检验单上最好能注明近期用药情况。
五、许多成分在红细胞中浓度比血清中高几倍或几十倍，溶血可影响该成分的分析，如血钾、乳酸脱氢酶、酸性磷酸酶、谷草转氨酶、a-羟丁酸脱氢酶、谷丙转氨酶等。最好及时分离血清，血钠在溶血时会降低。
血液采集时要特别注意防止溶血：
1. 注射器及针头必须洁净干燥无菌，最好使用一次性真空采血器。
2. 采血过程应顺利，压脉带压迫时间不宜超过一分钟，否则易引起血管内溶血。
3. 抽取血液后，应先将针头取下，缓慢将血液注入试管。
4. 抽血时产生的大量气泡，不要注入试管中，否则易引起溶血。
5. 分离血清及血浆时离心速度不宜过快，离心时间不宜过长。
六、不宜在剧烈运动后和情绪激动时采血。不得在输液的一侧静脉采血。
七、标本采集后应尽快送检，以免细胞代谢、酶类失活等影响检验结果。测定血糖、电解质、免疫球蛋白、C反应蛋白、补体等标本应及时分离血清，放4℃保存，并尽快送检。因故不能及时送检者，应1000-1500转/分离心十分钟，分离出血清或血浆，置4℃冰箱密封保存。
采 集 方 法
1. 除急诊和特殊病例外，一般化学检验项目均要求空腹采血。宜早晨空腹或禁食12小时后采血。
2. 尿液检验需收集中段尿(晨尿)。尿液生化检测需加入甲苯或二甲苯防腐(如每100ml加0.5ml甲苯或二甲苯)，并计24小时尿液总量，混匀后，取适量送检，应严格按照检测项目要求留足尿量。
3. 粪便常规检查应留取病变部分。
备注：
1. 生化检验标本要求空腹采血，及时分离血清，2℃-8℃冷藏送检，生化全套血清不能少于3ml，单项不少于1ml。
2. 葡萄糖由于可被血细胞中的酶酵解而降低，每小时可使糖浓度下降7%，故必须在2h内分离血清及时送检，不能用全血送检，2℃-8℃冷藏送检(在30℃只能稳定4h)。另外血糖饭后明显升高，故必须空腹12h左右抽血。
3. 总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)及血脂全套需空腹抽血，不能餐后抽血，2℃-8℃冷藏或室温送检。
4. 电解质检测必须在采血后3h内完成分离血清，由于采血后CO2丢失和PH值的改变，细胞内外的离子会进行交换而影响检测结果。电解质采血绝对不能用抗凝剂，也不能在输液时抽血，否则会影响检测结果。
5. 溶血对有些生化检测会产生干扰和空白增高，天冬酸氨基转移酶(AST)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)、羟丁酸脱氢酶(HBDH)、钾离子(K+)这些项目绝对不能采用溶血标本检测，因其血球与血清的误差可达20-100倍，另外溶血对P、Mg、Cr的检测结果也有影响。
6. 羟丁酸脱氢酶(HBDH)的检测需在2小时内分离血清，2℃-8℃冷藏送检。
7. 患者在注射脂肪乳剂时不能检测任何生化项目，否则结果毫无价值。
8. 肌酸激酶(CK)不稳定，对光、热、PH均敏感，总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)见光会分解，需避光冷藏送检。
9. 糖化血红蛋白必须用EDTA抗凝，不能有血凝块。2℃-8℃送检，常温超过24小时可影响结果。
10. 抗O、类风湿、梅毒抗体(PRP)、梅毒确诊试验(TPHA)、艾滋病抗体(HIV)不能有明显的溶血及脂血。
11. 乙肝DNA最好用血清检测，抗凝剂只能用EDTA，绝对不能用肝素，严重溶血、脂血影响检测结果。
12. 免疫球蛋白、补体采血必须绝对空腹，溶血影响结果，不能有脂血。
13. Fer检测标本溶血会使结果升高。
14. 浆膜腔积液检验时为防止细菌变性、凝块产生或细菌溶解，如不能及时送检应加适量EDTA或109mmol/L枸橼酸钠。
15. 脑脊液送检时为避免高蛋白凝固，可加适量100g/L的EDTA抗凝。
特殊标本的采集方法
糖耐量、C肽、胰岛素试验检测
1. 病人准备：试验前3日，每日食物中糖含量不低于150克，且维持正常活动，影响试验的药物(如：咖啡因、口服避孕药、水杨酸盐等)应在3日前停用，试验前病人应12小时内不进食。
2. 标本采集：临床上常用方法是清晨空腹抽血后，口服100克葡萄糖，再于给糖后0.5、1、2、3小时各取血1次。
3. 标本类型、标本量：血糖专用抗凝管，采血2ml。
4. 标本保存条件：2-8℃保存，当日送检。
微量元素血液标本的采集要求
1. 采血时不能戴乳胶手套(对锌有污染)，可使用“PE”(塑料)手套或不戴手套把手洗干净。
2. 橡皮塞对锌有污染，所以普通采血管不可使用，建议用本中心提供的专用抗凝管。
3. 使用抗凝管时，请检查管中有无肝素(液体或白色晶体粉末)，开盖前请轻磕管底，将盖子上吸附的肝素弹下。
4. 用本中心提供的专用肝素抗凝管，采集4ml全血，混匀抗凝，密封送检。
5. 血液注入抗凝管后，应盖紧盖子，立即轻轻颠倒混匀，以避免凝血。送检时请将管口封严，以防渗漏。如不能及时送检，应放置2-8℃冰箱保存。
6. 溶血对结果影响较大，应尽量避免。
皮质醇、促肾上腺皮质激素(ACTH)检测
正常人皮质醇、ACTH的分泌存在昼夜节律的变化，午夜22-24时最高，清晨6-8时最低，送检时请务必在申请单上注明采血时间段。皮质醇采集血清2ml，ACTH用血常规管抗凝，立即分离血浆2ml，冰冻保存。
儿茶酚胺检测
须停用中药、有色素药、香蕉、茶叶及巧克力3天以上，最好是临床症状最明显时采集(血压最高时)。用常规管抗凝，立即分离血浆2ml，冰冻保存。
尿17羟、尿17酮、VMA、尿儿茶酚胺检测
采集24小时尿量，浓盐酸10ml防腐，记录24小时尿总量，取样前停用中药、有色药及相关药物以减少干扰，取30-50ml避光保存送检。
产前血型血清学检查
1. 检测对象：血型不配合的夫妇(如女方为O型，男方为A、B或AB型)，或ABO血型虽然配合但有流产史、死胎史，特别是有新生儿黄疸史的夫妇更为合适。
2. 检测时间的选择：妊娠3-4个月和7-8个月测定。
3. 标本留取方法：抽取孕妇静脉血约3-7ml于干燥试管，不要抗凝，丈夫取静脉血1-2ml。
4. 注意事项：如已知夫妇ABO血型不合，可不需抽取丈夫血样，但需在验单上注明丈夫血型。如夫妇血型配合，则需按上法取夫妇血样。
5. 标本保存：以上标本2-8℃保存，5天内送检。
高危型人乳头瘤病毒(HPV)检测
1. 病人准备：三天内不能做阴道冲洗或使用阴道内药物；24小时内不能有性生活；非月经期采样检查。
2. 标本采集：
2.1 放置阴道张开器，用专用取样刷置于子宫颈口与粘膜交界处逆时针转三圈，停留10秒钟。
2.2 将取样刷放于专用试管中，在切口处折断多余部分。
2.3 拧紧盖子，送检。
3. 标本类型、标准量：宫颈刷出物，尽量避免保存液在取样过程中撒出，否则标本量不够无法检测。
4. 标本保存：4℃可保存3周；-20℃可保存半年。
病理组织标本采集方法
1. 前期准备：
1.1 临床医师逐项准确填写病理检查申请单，传递患者的主要临床信息。
1.2 容器须洁净，容器瓶口宜大。
1.3 若同一病人不同标本或同一标本的不同部位送检，请分别置不同容器。
2. 标本采集：
2.1 取标本时忌用有齿钳(镊)夹取或挤压，以免产生人为细胞变形。
2.2 采集标本时需保持其完整，切勿任意切割、翻转。
3. 标本固定：
3.1 宜采用10%甲醛溶液，有特殊要求者除外，例如检查组织内糖类及尿酸结晶需用纯乙醇固定，固定液的量至少为待检标本体积的4-5倍以上。
3.2 离体标本须立即全部固定，固定时容器须密闭，避免固定液挥发或溢出。
3.3 固定长条形标本时尽量避免弯曲扭转。
4. 标本核对：
4.1 病理申请单与标本核对无误后分别装入相应容器送检。
4.2 送检标本应包括全部手术切除部分。
4.3 接收标本必须进行严格的查对签收制度，标本袋(瓶)上姓名、条形码应与申请单上姓名、条形码相同，以免发生差错。
4.4 以下情况下属不合格标本：①主要病灶已被剜出的标本；②干涸标本；③严重自溶或腐败的标本；④未及时固定的标本；⑤与申请单不符合的标本。
病理细胞标本采集方法
1. 前期准备：
1.1 临床医师逐项准确填写细胞学检查申请单，传递患者的主要临床信息。
1.2 容器及玻片必须洁净。
1.3 有传染可能的标本，如结核性胸腹水、肺结核病人的支气管纤维镜灌洗液等，请在申请单上注明，以引起检查者的重视。
2. 标本采集：一般涂片：操作动作需轻巧，避免损伤细胞；涂片厚薄适宜；细胞成分涂在玻片右侧2/3范围内。
3. 标本固定：
3.1 固定液宜采用95%乙醇，有特殊要求者除外。
3.2 固定方法1：获取标本后，立即固定，固定15分钟后取出晾干。此法适用于宫颈刮片、痰液、鼻咽、胃肠道和肺支气管等刷片及穿剌细胞学涂片等。
3.3 固定方法2：获取标本后，先离心、涂片、晾干，再固定，固定15分钟后取出晾干。此法适用于尿液、浆膜腔积液及脑脊液等其他体液标本。
4. 标本核对：
4.1 细胞学检查申请单与标本核对无误后分别装入相应容器送检。
4.2 送检的标本必须新鲜，并有足够的数量。
4.3 接收标本必须进行严格的查对签收制度，标本袋(瓶)上姓名、条形码应与申请单上姓名、条形码相同。
4.4 以下情况属不合格标本：①未及时固定的标本；②干涸标本；③严重自溶或腐败的标本；④与申请单不符合的标本。
液基细胞学检测
1. 病人准备：病人在检查前三天停止性生活，检查前停止外用药，避免经期取样，并清洗外阴部。
2. 标本采集：采集标本使用专用液基细胞采样器(配套提供)，医生用窥阴器扩开阴道后先观察，宫颈表面粘液、血液较多者，应先用棉签轻轻擦净粘液血液，再用液基细胞采样器插入子宫颈内，直到只有刷子最下面的刷毛暴露在子宫颈外为止，按同一方向转动3-5次切勿来回转动。将含细胞的毛刷取下放入装有保存液的瓶中固定并保存细胞。
3. 标本类型：宫颈脱落细胞。
4. 标本保存：装有标本的保存液瓶在常温下可保存1-3月，如放入冰箱内可保存时间更长。
5. 注意事项：
5.1 用取样器采集标本时，取样器前面的长毛刷应插进颈管内以便采集到颈管上皮及移行区上皮细胞，采样时动作应轻柔，用力适中。
5.2 送检单及标本瓶上应写清病人姓名、年龄，并贴上条形码，送检单应详细填写各项内容，特别是月经情况、用药史及妇科治疗情况，如有特殊情况及要求也请写明，以便正确诊断。
高血压三项
1. 病人准备：β-阻断剂、血管扩张剂、利尿剂及甾体激素、甘草等影响体内肾素水平，一般要在停药后2周测定PRA，利血平等代谢慢的药物应在停药后3周测定。不适宜停药的病人改服胍乙啶等影响PRA较小的降压药。钠摄入量影响机体PRA水平，故病人测定PRA前3天应适当减少食盐摄入量，最好同时测定取血前24小时尿钠含量，以供分析PRA结果时参考。
2. 标本采集：肘静脉取血5ml，迅速注入放在冰水浴冷却的酶抑制剂的专用抗凝管中，摇匀，即刻再放回冰水浴中冷却，待离心时取出。1000rpm离心5min(最好在4℃离心)，分离血浆。此操作应在15min内完成。
3. 标本类型、标本量：专用抗凝管采血，分离血浆，取2ml送检。
4. 标本保存：低温冰箱保存(-20℃以下)，可保存2个月。
5. 注意事项：
5.1 卧位血是指在病人早晨醒来未下床活动前采集的血标本；立位血是指病人早晨下床活动3小时采集的血标本。
5.2 标本未及时分离血浆、反复冻融、溶血、保存不当、使用过期抗凝管等均可使结果受到影响。
空气培养采样方法
1. 采样时间：选择消毒处理后与进行医疗活动之前采样。
2. 采样高度：与地面垂直高度80-150cm。
3. 布点方法：
室内面积≤30m2，设一条对角线上取3点，即中心一点，两端各距墙1m各取一点；室内面积>30m2，设东、南、西、北、中5点，其中东、南、西、北点距墙1m。
4. 采样方法：用9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5分钟后送检培养。
5. 标本保存：
5.1 采样后必须尽快送检，时间不超过6小时，若样品保存于0-4℃，送检时间不超过24小时。
5.2 在平皿上注明各采自哪个室，用胶布把平皿和平皿盖子固定好以免在送检途中平皿和平皿盖子分离而造成污染。
鼻咽拭子的采集(EB-DNA检测)
1. 标本采集：标本必须利用鼻咽拭子(为软且可弯曲的铝丝，尖端含藻酸钙棉)采集标本。采集标本时，病人的头部不可乱动，然后将鼻咽拭子缓缓地伸进鼻孔，直至鼻咽后部(注意：不可用力)，轻轻地转动，并停留约20-30秒，然后迅速取出。将标本置于盛有1ml生理盐水的无菌试管中，送检。
2. 标本的保存条件：4℃可保存半个月，-20℃可保存3个月。
骨髓检查的要求和注意事项
1. 涂片要求：二张血片，六张骨髓片，怀疑白血病则涂八张骨髓。血片注明“B”，骨髓片注明“M”，以示区别。
2. 申请单注意事项：
2.1 病例摘要：应填写全面，尤其是肝、脾、淋巴结出血状况等与血液病相关的症状应填写清楚。
2.2 化验结果：血象结果一定不能缺，如有可能，MCV、MCH、MCHC及分类也一并填上。
2.3 临床诊断应合理，有病名应把病名写清楚。
2.4 申请目的要明确，如病人贫血加做铁染色。
2.5 采取骨髓部位也应填上，如采取不顺应重抽，以免耽误病人。
2.6 写上主治医生联系电话，如科室、手机等(密切与临床相结合)。
性病培养全套标本采集方法
一、支原体(解脲、人型)培养+药敏
1. 病人准备：病人在采集标本做该项目时至少停用抗生素一周以上。
2. 标本类型：生殖器分泌物。
3. 标本采集：
3.1 支原体对干、热抵抗力差，标本采集后应尽快接种于支原体培养基并置35℃培养箱培养。
3.2 男性：用特别细的无菌棉拭子沾取无菌盐水少许深入尿道口内2-2.5cm处取分泌物，将拭子按无菌手续洗在支原体运输培养基中送检。
3.3 前列腺液亦可用棉拭子尽量多的沾取洗于支原体运输培养基中。
3.4 中段尿可直接送检。
3.5 女性：用沾取少许无菌生理盐水的棉拭子取宫颈管内口1-2cm处单层柱状上皮细胞，取样拭子不可碰阴道壁，将拭子按无菌操作洗在支原体培养基中送检。
4. 标本保存条件：室温可保存8小时；4℃可保存24小时。
二、淋球菌培养+药敏
1. 病人准备：病人在采集标本做该项目时至少停用抗生素一周以上。
2. 标本类型：生殖器分泌物。
3. 标本采集：
3.1 男性尿道炎急性期患者可用沾有少许生理盐水的无菌拭子取脓性分泌物。
3.2 非急性期病人，可用无菌细小棉拭子沾取生理盐水轻轻插入尿道2-4cm深处，转动拭子，然后取出。
3.3 女性患者先用无菌棉拭子擦去宫颈口分泌物，再用另一沾有生理盐水的棉拭子插入宫颈口内1cm处旋转，取出分泌物。
3.4 采标本以后马上把棉拭子插入淋球菌培养基中接种并置35℃培养箱培养。
4. 标本保存条件：培养常温下不超过24小时送检。
三、衣原体抗原检测
1. 标本类型：生殖器分泌物。
2. 标本采集：
2.1 男性患者将拭子插入尿道2-4cm，旋转3-5秒钟后取出，将取样后的拭子放入无菌试管中送检。
2.2 女性患者在取样前先用另外的拭子或棉球将宫颈口外的粘液抹去，再将取样拭子插入宫颈管内至棉花部分全部插入，旋转15-20秒取出，不要碰到宫颈外及阴道壁，将取样后的拭子放入无菌试管中送检。
3. 标本保存条件：标本采集后在2-8℃保存，24小时内送检。
四、念珠菌培养+药敏
1. 病人准备：病人在采集标本做该项目时至少停用药物一周以上。
2. 标本类型：生殖器分泌物。
3. 标本采集：怀疑阴道念珠菌感染需要做培养及做药物敏感试验的患者用沾有生理盐水的棉拭子沾取大量豆腐渣样白带或可疑白带倒悬于无菌试管中送检。
4. 标本保存条件：标本采集后在2℃-8℃条件下保存，24小时内送检。
注意：需要开展以上检验项目的单位请提前通知我中心，以便送上所需运输培养基或专用管，同时在采样的当天及时把标本取回，当天接种。请各合作单位积极配合。
基因诊断标本的采集方法
1. 血清/血浆
采集血清标本时，取被检者静脉血，用无菌注射针头抽取2ml，收集于无菌管中，室温放置不超过4h，1600g离心20分钟，吸取血清(切勿吸入红细胞)，转入另一无菌管中备用。
采集血浆标本时，用无菌注射针头抽取2ml静脉血于含EDTA作为抗凝剂的无菌管中(不可用肝素抗凝)，室温放置不应超过4小时，1600g离心20分钟，分离血浆(切勿吸入红细胞)，转入另一无菌管中备用。
2. 分泌物
要求采集前被检者2小时不能排尿。
(1) 男性：先清洁尿道口，将棉拭子伸入男性尿道1cm，旋转3-5次获取标本(应略带黏膜)。将取样后的棉拭子放入装有1.0cm无菌生理盐水的无菌管中漂洗片刻，用盖子盖紧，密闭送检。
(2) 女性：先清洁阴道口或宫颈口，用带有无菌生理盐水的棉拭子洗去阴道口或宫颈口过多的分泌物，换用另一支无菌生理盐水的棉拭子伸入宫颈口2-3cm，稍用力旋转3-5次，以获得分泌物，将取样后的棉拭子放入装有1.0cm无菌生理盐水的无菌管中漂洗片刻，用盖子盖紧，密闭送检。
3. 所有用于采集标本的试管或容器必须是无菌的；要求采取全血的标本必须用EDTA或枸橼酸钠抗凝(不可用肝素抗凝)，采血后立即轻轻摇匀。
细菌培养标本的收集方法
总则：用于细菌培养的标本收集时应严格执行无菌操作，特别是原本应是无菌的标本。病人在采集标本做该项目时最好停用抗生素一周以上，对已用抗生素或不能停药者可在下一次抗生素使用前采样。
1. 下呼吸道分泌物(痰液)
以晨痰为佳，采集前应用清水反复漱口，用力咳出呼吸道深部痰，置于无菌容器中。若标本不能及时送检，可暂存4℃冰箱。
2. 尿液(中段尿)
留取洁尿标本应由医院洁尿室或由护理人员协助无菌采取中段尿约5-10ml入无菌试管中，不能及时送检者可暂存4℃冰箱。
3. 粪便
取有粘液、脓血部分粪便约2-3g(液状粪便则取絮状物)，置于无菌容器中(用棉拭子挑取粪便插入Cary-Blair运送培养基或PH7.0的磷酸甘油中送检，可提高病原菌检出率)。
4. 眼、耳、鼻、咽拭子
用无菌棉拭子采集可疑部位的分泌物，置于无菌试管内放2℃-8℃冰箱内待检。
5. 脓液
无菌生理盐水擦拭病灶表面后，用棉拭子采集病灶深部的脓液或分泌物，然后将棉拭子倒置于无菌试管中。
6. 血液、骨髓液
(1) 凡怀疑菌血症或败血病的患者，在出现临床症状后，应尽快采血做培养，最好在初发期、高热或寒战时采血，尽量在使用抗菌药前采血。对已用药物且因病情不允许停药者，应在下一次用药前采血。
(2) 无菌采集血液标本，成人每次采血5-10ml，小儿采血3-5ml，骨髓穿刺液1-2ml。消毒接种瓶口，更换针头或过火消毒针头后将血接种在瓶内，轻轻摇匀。
(3) 从抽血到接种入瓶，动作要快，防止血液凝固，注意不要将注射器内空气注入瓶中。
(4) 常温保存送检。
7. 穿刺液：胸腹水、心包液，关节腔液、鞘膜积液
无菌手续抽取后，注入含肝素(0.5mg肝素可以抗凝5ml标本)的无菌试管中，轻轻颠倒试管10余次，使肝素与穿刺液混匀达到抗凝的目的。放2℃-8℃冰箱保存。
8. 胆汁
由专科医生无菌采取胆汁10ml注入无菌试管。
9. 脑脊液
无菌采取脑脊液3-5ml，置无菌试管内保温送检，送检过程中不可放冰箱暂存。
10. 生殖器官标本
阴道、子宫颈及前列腺等部位分泌物应由医师采集，收集于无菌试管内送检。怀疑淋病奈瑟菌检查时，不论男女尿道及宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深取样送检，要避免阴道分泌物污染拭子。
11. 注射剂、生物制品和敷料等标本
一般应以在同一次高压蒸汽锅内灭菌的注射剂、生物制品和敷料为一批或同一批制品为一批，每一批一般采取6份标本，即自高压锅内靠近锅壁、锅中央、锅面或锅盖处各取2份，而立式高压蒸汽灭菌器内物品则应取上、中、下各2份。
12. 烧伤标本
以无菌棉拭子直接采取多个部位创面的脓汁分泌物放入无菌试管中。
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