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zhouyi_2000
丁香园中级站友
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2004-02-22 11:38
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胰岛临床移植相关问题:
移植前胰岛培养问题:
移植前头24h在37℃中培养,24----48h其间在22℃培养,培养用80cm2培养瓶培养,浓度最大为30000IEQ/30ml培养基。如果胰岛纯度>90%,则每瓶最多30000IEQ/30ml培养基。如果纯度<90%,则需要的培养瓶数=纯化后的IEQ/30000IEQx纯度%
24小时后如果胰岛出现聚集则应放于22℃培养并换液,换液时倾斜培养瓶至45度,让所有胰岛沉淀1分钟,无菌吸出20ml培养基并加入新鲜培养基,重新在22℃下培养。
移植时胰道细胞靠重力进行灌注,并每小时检测血糖。如果餐前血糖〉8.0mmol/L; 餐后2小时血糖〉10.0mmol/L时应保留胰岛素注射。
移植前患者检查:
全血细胞计数;临化全项;尿常规;前列腺特异抗原(men> 40);乳腺X线(women> 40);腹部超声;HIV ;CMVIgG ; EB;核抗原IgG ; varicella-zoster(带状疱疹)IgG;梅毒;toxoplasmosis(弓形体病); 淋巴细胞毒性抗体筛选;
1 空腹血糖;2 HbA1c;3 MAGE(分别于移植前、中及移植后1个月检测);4 meal tolerance tests(分别于移植前、中及移植后1周、3,6,12,18个月检测);5 餐前和餐后90分钟血糖和C-肽
胰导质量监控:
1 Islet quantity------------counting by size; volume; purity; IE count
2 Islet Histology----------hematoxylin(苏木素)-eosin(胰岛特异染色)
Aldehyde fuchsin(醛品红)---α细胞染成粉色;β细胞染成暗紫色
Immunoperoxidase staining with specific islet cell hormones
3 Islet Vibility----Tryphan blue is not very helpful
Perifusion Test(in vitro)-----用加血清的含60mg/dl葡萄糖的Kreb Bicarbonate Media培养胰岛40分钟,然后300mg/dl Glucose 30mins,然后300mg/dl Glucose +10mM theophylline(茶碱) 30mins,最后60mg/dl Glucose 30mins
Insulin Stimulation Index
4 Islet Sterility-----------Samples---------------Donor Pancreas; Reagents; Processing Steps; Preserved Islets
Testing----------------Filtration culture at 24℃+37℃ 7ds to assay the bacteria and fungus
术前服用免疫抑制剂、抗生素及保肝药
1 Sirolimus(Rapamune, Wyeth-Averst Canada)
首剂 0.2mg/kg,然后 0.1mg/kg/d 口服
并监测血药浓度:前3个月 12-15ng/ml;以后 7-10ng/ml
2 Tacrolimus(Prograf , Fujisawa Canada)
开始时,1mg Bid PO. ;3个月后调整至3-6ng/ml/12hs (IMX酶联免疫法 Abbott)
3 Daclizumab(Zenapax, Roche Canada)
每1mg/kg/14d IV, 共5次
如果第二次移植时间距第一次超过15个星期,则重复上述剂量。以上还需要根据肾功、移植胰岛功能、自体免疫反应实行用药个体化。
4 术中胰岛一经植入
立即 500mg 万古酶素(vancomycin)和 500mg 亚胺培南(imipenem) 静脉滴注
5 术后口服: Vit E 800u/d 可减轻白细胞-内皮细胞作用,抑制巨噬细胞排斥,从而增
加移植稳定性
Vit B6 100mg/d
Vit A 2500u/d
更昔洛韦(gancyclovir) 1g/d tid PO, 共14周 目的是减少移植物丢失、防止淋巴增生紊乱。
6 术后吸入: 喷他脒(pentamidine) 300mg/month
最终胰岛移植悬液溶于M199中含500u肝素和20%人血清白蛋白,灌注5min以上
当胰岛灌注完毕,将导管部分退出,明胶海绵粒子拴塞到肝内穿刺管道
7 Pentoxifylline(己酮可可碱) 可降低血TNF-α水平,并减少巨噬细胞释放TNF-α,400mg,bid po
8 Vit PP(nicotinamide, 烟酰胺) 可减轻氧化应激和自由基的损害,250mg,tid po
9 metformin(二甲双胍) 增加外周组织对胰岛素敏感性,恢复由于长期暴露于高自由脂肪酸或高血糖中导致胰岛功能受损时胰岛的分泌活性,减少胰岛功能丧失。400mg, bid po
移植后监测:
1 神经系统疾病(neurothesiometer method);视网膜疾病(检测眼底有无血管出血);
2 24小时尿蛋白、血肌酐、血脂;HbA1c;一个月测一次
3 口服糖耐量实验(移植后不用依赖胰岛素后6和12个月,以后1年测一次);
具体用法:先检测空腹血糖基线水平,然后口服75g Glucose ,然后分别于30,60,90,
120分钟检测血糖。
4 以50% dextrose 300mg/kg body wt. 静脉注射大于1分钟进行静脉注射糖耐量实验(IVGTT),用以检测移植后1周、3,6,12,18个月的以下各项指标:
AIRg----表示在第3、4、5分钟时间点上基线上方的样品的胰岛素平均值;
AIRarg-----表示取2、3、4、5分钟时间点中3个最高值的胰岛素平均值;
Kg--------是IVGTT法中10-30分钟期间以自然对数表示的血糖值制成的曲线的坡度;
AUCinsulin and AUCc-p----分别代表在基线上方连续检测30分钟胰岛素分泌和C肽水平所占的面积
5 头一个星期每天检测空腹血糖和C-肽,以后每星期测一次
6 Ensure Tests------meal tolerance test
即先测基线水平的空腹血糖和C-肽,然后喝360ml Ensure(8.5g脂肪;44g碳水化合物; 17g 蛋白质---共391kcal),90分钟后再次检测;如此在第一次移植后2周,停用胰岛素后2周,3,6个月,以后每6个月测一次。检测时应在早上,并且患者不能服用胰岛素,如果血糖在检测前>15mmol/L,应停止实验并给予胰岛素治疗。
7 IVGTTs和静脉精氨酸刺激实验
在第一次移植和第二次移植之间,第二次移植后停用胰岛素后1,3,6个月,以及以后每6个月测一次。具体用法:按300mg/kg body wt. 给予50%dextrose分别于-10min, 0min采血,然后缓慢注入(>1min)。然后在3,4,5,7,10,15,20,25,30分钟时采血检测血糖、胰岛素、C-肽。另选一天以5g 盐酸精氨酸在禁食状态下于-10min, 0min采血然后静脉注入(>0.5min)。然后在2,3,4,5,7,10分钟检测胰岛素。
8 HOMA(homeostasis model assessment)---内环境稳定模型评价
以Levy公式为准,检测胰岛素敏感度。
Levy JC, Matheus DR, Hermans MP: Correct homeostasis model assessment(HOMA) evaluation uses the computer program. Diabetes Care, 1998; 21: 2191-2192.
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